常用的菌种保藏方法有哪些?
菌种保存的方法有斜面低温保藏法、液体石蜡覆盖保藏法、沙土保藏法、滤纸保藏法、甘油管保存法、冷冻干燥保存法。1、斜面低温保藏法:将菌种接种到适合的固体斜面培养基上,用油纸将棉塞部分包扎好,然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存。2、液体石蜡覆盖保藏法:使用液体石蜡将斜面菌覆盖住,使其和空气隔绝。
一、菌种保存的方法有哪些
1、斜面低温保藏法
(1)将菌种接种到适合的固体斜面培养基上,等到菌种充分生长过后,使用油纸将棉塞部分包扎好,然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存。
(2)如果是霉菌、放线菌及有芽孢的细菌,一般可以保存2-4个月左右,需要移种一次。如果是酵母菌,一般可以保存2个月左右,需要每个月移种一次。
2、液体石蜡覆盖保藏法
(1)将液体石蜡装在三角烧瓶中,并使用棉塞塞好,用牛皮纸进行包扎,然后在0.1MPa,121.3℃的环境下灭菌30分钟左右,接着将其放置在40℃的温箱之中,将水汽蒸发掉。
(2)将需要保藏的菌种,用适合的斜面培养基进行培养,得到健壮的孢子或者是菌体。
(3)使用灭菌过的吸管将液体石蜡吸出,注入斜面上,用量为高出斜面顶端1cm左右为宜。
(4)将试管直立,放置在低温或者是室温之下进行保存。
(5)霉菌、放线菌、芽孢细菌可以保藏2年以上不死,酵母菌可以保藏1-2年,一般无芽孢细菌可以保藏1年,脑膜炎球菌可以保藏3个月左右(37℃环境下)。
3、沙土保藏法
(1)准备好河沙,加入10%稀盐酸,然后加热煮沸30分钟左右,将里面的有机质去掉,然后将酸水倒掉,用自来冲洗至ph为中性,接着烘干,过筛(40目筛子),去掉粗颗粒。
(2)准备好非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土,浸泡洗涤数次,直至ph为中性,然后烘干,碾碎,过筛(100目筛子),去掉粗颗粒。
(3)将沙和土按照2:1的比例混合,装入试管或者是安瓿管中,塞好棉塞,在1212℃的环境下灭菌30分钟左右。
(4)将菌种在斜面培养基中培养,得到健壮的菌体,然后向斜面培养物中注入3-5ml无菌水,洗下细胞或孢子制成菌悬液。
(5)使用灭菌过的吸管吸取菌悬液,然后均匀滴入沙土管中(0.2-0.5ml/管)。如果是放线菌或霉菌,可以直接挑取孢子拌入沙土管中。
(6)真空抽去沙土管中的水分。
(7)将沙土管用火焰熔封,然后存放在低温(4-6℃)干燥处保藏,或者是将沙土管用牛皮纸或塑料纸包好,放置在干燥器内保存。
长期保存菌种的方法?
液体石蜡保存法
液体石蜡保存法就是在斜面菌种或穿刺菌种表面覆盖一层液体石蜡,从而隔绝空气,减少菌种及培养物水分挥发,保藏温度要求在4℃下即可。
将培养好的菌种斜面,缓慢倒入无菌的液体石蜡,使石蜡高出斜面顶端1厘米,直立放置,低温保存就可以,霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死,酵母菌可保藏1-2年。
沙土保存法
沙土保藏法是将菌种吸附在适当的载体上,而后进行干燥的保藏。将培养好的菌种接入沙土管内,用真空泵抽气至干。细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏,前两者可保藏2年左右,有些丝状真菌甚至可保藏14-17年之久。
甘油管保存法
甘油管保存是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。配置30%浓度的无菌甘油,将培养好的菌种与甘油充分混合均匀,放入-20℃保存。
冷冻干燥保藏法
冷冻干燥保存法就是将菌种与保护剂混合均匀后,快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分,兼具低温、干燥、除氧三方。干燥后的菌种在真空环境下可长期保存。