保藏菌种的方法有哪些?
保存方法:
(一)培养基保存法
利用各种斜面和半固体培养基,加上石蜡油保存菌种,是一种最常用而又简易的保存方法。
1.普通琼脂斜面保存法:肠道杆菌、葡萄球菌等一般细菌可接种于不含糖的普通琼脂斜面上,斜面底部应加少许无糖肉膏汤,以防干涸。经35℃培养18~24h后,移种于4℃冰箱中,一般可保存一个月,每月传代一次。
2.血液琼脂斜面保存法:链球菌、肺炎链球菌应接种于血液琼脂斜面上,35℃培养生长后,置4℃冰箱中保存,链球菌须半个月至1个月移种一次,肺炎链球菌的新分离菌株须2~4天移种一次,以后逐渐延长移种时间,在适应后可延至半个月移种一次。
3.巧克力色斜面保存法:宜保存脑膜炎奈瑟菌,并在35℃孵箱中保存,一般每2天移种一次。
4.鸡蛋斜面保存法:适于保存含有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的细菌,一般可保存一个月。
5.半固体穿刺保存法:将细菌接种于琼脂半固体或血清琼脂半固体内,经35℃培养18~24h,再以无菌方法加入灭菌的液体石蜡。高度约lcm,置4℃冰箱保存。保存时间可达3~6个月。
(二)干燥保存法
原理是将细菌体内的水分蒸发掉,使其处于休眠和代谢停滞状态,从而达到长期保存菌种的目的医|学教|育网搜集整理。菌种干燥后低温保存,可保存数年至十几年。
(三)冷冻干燥保存法
本法又称冷冻真空干燥法。它综合利用了各种有利于菌种保存的因素(低温、干燥和缺氧等),是目前最有效的菌种保存方法之一。用本法保存的菌种具有成活率高,变异性小等优点,保存期一般3~5年,有的可长达10年以上。
微生物菌种保藏方法?
1、传代保藏 传代保藏菌种是微生物保存中最常用的方法之一。很多微生物在低温或者干燥处理时,会很快死亡,为了保存菌种的活性,就要定期不断的进行菌种转接、培养后再保存。
2、斜面低温保藏 将待保藏的菌种接种在合适的斜面培养基上,在相应的条件下培养至得到充足的菌体或者孢子,随后密封试管置于4℃左右保存,具体保存温度按照保存菌种设定。保藏时间依微生物的种类从1个月到4个月不等。
3、冷冻干燥保藏 冷冻干燥保藏法为菌种保藏方法中最有效的方法之一,对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用,这种方法适用于菌种长期保存,一般可保存数年至十余年。我国大多数生物制品菌种都是采用该法保藏。
4、半固体穿刺保藏 配制半固体培养基,高压湿热灭菌后倒于无菌试管中至约1/3,待培养基凝固,用接种环从平面培养基上挑取单菌落,穿入培养基若干次。在合适的条件下进行培养至菌体旺盛生长,之后密封试管,根据菌种特点在4 ℃左右或者凉爽干燥处保存。保存时间至少可以达到1 年,对于有些菌种甚至能达到20 年之久。
5、液氮超低温保藏 液氮超低温保藏法是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法。液超低温保藏法是把菌种装在含有冷冻保护剂的安瓶瓶内,将该安瓶瓶放人液氮(-196℃)中保藏。
6、冷冻真空干燥保藏 将处于成熟期的微生物培养物悬浮于无菌的血清、卵白、脱脂奶或者海藻糖等保护剂中制成浓菌液,分装到无菌的安瓿瓶中,于低温冰箱中冷冻,达到预定温度后对浓菌液进行冷冻干燥处理,之后在真空状态下融封安瓿瓶,于20 ℃保藏。
7、蒸馏水保藏 蒸馏水保藏菌种的方法普遍的应用于医学微生物、食品微生物和工业微生物中。将菌体悬浮于蒸馏水中,即可在室温下保存数年,此法应注意避免水分的蒸发。